培養(yǎng)基的配制 培養(yǎng)基可按處方配制,也可使用按處方生產的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基。
在制備培養(yǎng)基時,應選擇質量符合要求的脫水培養(yǎng)基或單獨配方組分進行配制。脫水培養(yǎng)基應附有處方和使用說明,配制時應按使用說明上的要求操作以確保培養(yǎng)基的質量符合要求,不得使用結塊或顏色發(fā)生改變的脫水培養(yǎng)基。脫水培養(yǎng)基或單獨配方組分應在適當的條件下儲存,如低溫、干燥和避光,所有的容器應密封,尤其是盛放脫水培養(yǎng)基的容器。商品化的成品培養(yǎng)基除了應附有處方和使用說明外,還應注明有效期、貯存條件、適用性檢查試驗的質控菌和用途。
為保證培養(yǎng)基質量的穩(wěn)定可靠,各脫水培養(yǎng)基或各配方組分應準確稱量,并要求有一定的精確度。配制培養(yǎng)基常用的溶劑是純化水,特殊情況下,可能需要用去離子水和蒸餾水。應記錄各稱量物的重量和水的使用量。配制培養(yǎng)基所用容器和配套器具應潔凈,可用純化水沖洗玻璃器皿以消除清潔劑和外來物質的殘留。對熱敏感的培養(yǎng)基如糖發(fā)酵培養(yǎng)基其分裝容器一般應預先進行滅菌,以保證培養(yǎng)基的無菌性。
脫水型培養(yǎng)基應*溶解于水中,再行分裝與滅菌。配制時若需要加熱助溶,應注意不要過度加熱,以避免培養(yǎng)基顏色變深。如需要添加其它組分時,加入后應充分混勻。
應按照生產商提供或使用者驗證的參數進行培養(yǎng)基的滅菌。商品化的成品培養(yǎng)基必須附有所用滅菌方法的資料。培養(yǎng)基滅菌一般采用濕熱滅菌技術,特殊培養(yǎng)基可采用薄膜過濾除菌。
培養(yǎng)基若采用不適當的加熱和滅菌條件,有可能引起顏色變化、透明度降低、瓊脂凝固力或pH的改變。因此,培養(yǎng)基應采用驗證的滅菌程序滅菌,培養(yǎng)基滅菌方法和條件,應通過無菌性試驗和促生長試驗進行驗證。此外,對高壓滅菌器的蒸汽循環(huán)系統(tǒng)也要加以驗證,以保證在一定裝載方式下的正常熱分布。溫度緩慢上升的高壓滅菌器可能導致培養(yǎng)基的過熱,過度滅菌可能會破壞絕大多數的細菌和真菌培養(yǎng)基促生長的質量。滅菌器中培養(yǎng)基的容積和裝載方式也將影響加熱的速度。因此,應根據滅菌培養(yǎng)基的特性,進行全面的滅菌程序驗證。,
應確定每批培養(yǎng)基滅菌后的pH(冷卻至室溫25℃測定)。若培養(yǎng)基處方中列出pH的范圍,除非經驗證表明培養(yǎng)基的pH允許的變化范圍很寬,否則,pH的范圍不能超過規(guī)定的±0.2。
制成平板或分裝于試管的培養(yǎng)基應進行下列檢查:容器和蓋子不得破裂,裝量應相同,盡量避免形成氣泡,固體培養(yǎng)基表面不得產生裂縫或漣漪,在冷藏溫度下不得形成結晶,不得污染微生物等。應檢查和記錄批數量、有效期及培養(yǎng)基的無菌檢查。
培養(yǎng)基的貯存
自配的培養(yǎng)基應標記名稱、批號、配制日期等信息,并在已驗證的條件下貯藏。商品化的成品培養(yǎng)基標簽上應標有名稱、批號、生產日期、失效期及培養(yǎng)基的有關特性,生產商和使用者應根據培養(yǎng)基使用說明書上的要求進行保存,所采用的保藏和運輸條件應使成品培養(yǎng)基低限度的失去水分并提供機械保護。
培養(yǎng)基滅菌后若儲藏在高壓滅菌器中,質量可能會受影響,一般不提倡這種存放法。瓊脂培養(yǎng)基不得在0℃或0℃以下存放,因為冷凍可能破壞凝膠特性。
培養(yǎng)基應避光保存,若要長期保存,應置于密閉容器中以防止水分流失。瓊脂平板最好現(xiàn)配現(xiàn)用,如置冰箱保存,一般不超過一周,且應密閉包裝,若延長保存,保存期需經驗證確定。
固體培養(yǎng)基滅菌后的再融化只允許一次,以避免因過度受熱造成培養(yǎng)基質量下降或微生物污染。培養(yǎng)基的再融化一般采用的水浴加熱或流通蒸汽。若使用微波爐,應避免培養(yǎng)基過度受熱及水分的蒸發(fā),更要注意安全。融化的培養(yǎng)基應置于45~50℃的水浴中,不得超過8小時。傾注培養(yǎng)基時,應擦干培養(yǎng)基容器外表面的水分,避免容器外壁的水滴進入培養(yǎng)基中造成污染。
使用過的培養(yǎng)基(包括失效的培養(yǎng)基)應按照國家污染廢物處理相關規(guī)定進行處理。